Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОТОКСИКОЗОВ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ГРИБАМИ РОДОВ ASPERGILLUS, PENICILLIUM, FUSARIUM, STACHYBOTRYS, DENDRODOCHIUM




Цель занятий. Ознакомить студентов с характеристикой мико-токсинов, вызывающих микотоксикозы, грибами-продуцентами этих токсинов и методами исследований для постановки диагно­за на микотоксикозы.

Оборудование и материалы. Культуры грибов родов Aspergillus, PeniciUium, Fusarium, Stachybothrys и др. на агаре Чапека или дру­гих средах в чашках Петри (в больших пробирках), препароваль­ные иглы или микологические крючки, предметные и покровные стекла, микроскопы, таблицы и плакаты по данной теме.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Микотоксикозы. Болезни животных и человека; харак­теризуются отравлением, которое возникает при поедании кор­мов (пищи), содержащих токсические продукты жизнедеятель­ности микроскопических грибов-плесеней — микотоксины (от греч. mykes — гриб и toxinum — яд). Известно около 250 видов раз­личных микроскопических грибов, продуцирующих 100 токсических метаболитов. Природными субстратами грибов-проду­центов микотоксинов служат разнообразные сельскохозяйствен­ные культуры. К микотоксинам чувствительны почти все виды домашних, диких животных, птицы и рыбы. Наименование микотоксикоза происходит от названия токсина или гриба-проду­цента. При диагностике микотоксикоза наибольшее внимание уделяют обнаружению токсина, поскольку гриб-продуцент в ряде случаев к моменту исследования погибает и, кроме того, один и тот же микотоксин могут синтезировать различные виды грибов.

Лабораторная диагностика микотоксикозов основана на ре­зультатах токсико-биологических, органолептических, микологи­ческих и физико-химических исследований.

Материал для исследования. В лабораторию направляют пробы всех кормов, входивших в суточный рацион животного в течение одного месяца до проявления болезни, а также остатки кормов из кормушек, содержимое желудочно-кишечного тракта павших животных и др. Отбор средних проб корма проводят ветеринар­ные и зооинженерные специалисты с представителями предпри­ятий. Отобранную среднюю пробу делят на две части, упаковы­вают в чистые сухие стеклянные банки объемом 2...3 л, гермети­чески закрывают и пломбируют. Одну часть отправляют в лабо­раторию, другую хранят в хозяйстве в течение одного месяца в условиях, предотвращающих порчу или вторичное загрязнение. В документе указывают цель исследования, вид кормового сред­ства, назначение, массу всей партии, место отбора пробы, основ­ные клинические признаки у больных животных. Прилагают ко­пию акта вскрытия трупов (при гибели животных), копию экс­пертиз ветеринарной лаборатории об исключении инфекционных болезней и отравлений животных химическими или растительными ядами (если такие исследования были проделаны лабораторией).

Органолептическое исследование. Определяют внешний вид, цвет, запах корма, выявляют признаки, отличающие дефектный корм от доброкачественного (изменение цвета; затхлый, плесне­велый или гнилостный запах; наличие на поверхности корма ми­целия гриба и др.). О санитарном качестве зерна можно косвенно судить по цвету и состоянию зерновых оболочек.

Токсикологическое исследование. Проводят на различных био­логических моделях: кроликах, аквариумных рыбках гуппи поро­ды Винер, белых мышах или сельскохозяйственных животных.

На кроликах ставят кожную пробу. К 50 г измельченного кор­ма добавляют 150 мл диэтилового эфира (эфир для наркоза) или ацетона. Смесь встряхивают при комнатной температуре с помо­щью шуттель-аппарата 3 ч. Экстракт фильтруют и выпаривают до полного исчезновения запаха. Налет, оставшийся на стенках чашки, смывают небольшим количеством эфира и используют для биопробы, которую ставят на кроликах массой 2...2,5 кг. Предварительно у кролика в области бедра, лопатки или бока выстригают участок кожи 6 см2. Пигментированная или с при­знаками шелушения кожа непригодна для исследования.

На одном кролике можно ставить не более четырех проб. На выстриженный участок кожи кролика наносят стеклянной ло­паткой половину экстракта и легко втирают его. При восковидной консистенции экстракта его предварительно подогревают. Часть участка оставляют свободной от экстракта как конт­рольную. Через 24 ч наносят оставшийся экстракт. Чтобы пре­дупредить его слизывание, кролику надевают воротник (не менее чем на три дня). Учет проводят на следующий день после повтор­ного нанесения экстракта и продолжают вести наблюдение в те­чение 3...5 дней в зависимости от реакции, после чего дают окон­чательную оценку: а) корм нетоксичный — отсутствуют воспали­тельная реакция и изменения на коже; б) корм слаботоксич­ный — шелушение кожи, отечность, болезненность, незначи­тельное утолщение кожи с образованием отдельных корочек; в) корм токсичный — резкая гиперемия, отек, утолщение кожи, болезненность, появление язвы и струпа.

В качестве дополнительного теста определяют токсичность кормов на аквариумных рыбках. Методика основана на извлече­нии микотоксинов из фуражного зерна, продуктов его перера­ботки и комбикормов, экстракции хлороформом и исследовании на рыбках гуппи. В раствор экстракта помещают 5 рыбок незави­симо от пола и возраста. Ведут наблюдение в течение 24...30 ч. Оценка степени токсичности корма: а) нетоксичный — при гибе­ли не более одной рыбки в течение 24 ч; б) слаботоксичный — при гибели 2...4 рыбок; в) токсичный — при гибели всех 5 гуппи за тот же отрезок времени.

Методика определения токсичности корма на белых мышах основана на извлечении токсических веществ из жмыхов, кормо­вых дрожжей ацетоном и введении концентрированного экст­ракта однократно в желудок мышам массой 20...25 г. Животных наблюдают в течение 3 сут, не ограничивая их в корме и питье. Оценка результатов корма: а) нетоксичный — мыши живы, на вскрытии у убитых мышей патологоанатомических изменений нет; б) слаботоксичный — мыши живы, при вскрытии у убитых обнаруживают геморрагическое воспаление желудочно-кишеч­ного тракта, чаще очаговое; в) токсичный — гибнут все мыши (или одна), на вскрытии павших или убитых устанавливают ге­моррагическое воспаление желудочно-кишечного тракта, часто дегенерацию тканей печени, почек или кровоизлияние в парен­химатозных органах. Если токсичность корма не выявлена всеми перечисленными методами, подозрительные корма скармливают лабораторным животным (цыплятам, утятам, голубям, белым мышам, морским свинкам, кроликам) или животным тех видов, которые болели в хозяйстве.

Микологический анализ. Включает в себя выделение из кормов и идентификацию грибов-продуцентов микотоксинов. С этой целью из кормов делают посевы в чашки Петри с агаром Чапека, сусло-агаром или в жидкую среду Билай. Грубые корма высевают во влажные камеры со средой Ван—Итерсона. Перед посевом агар расплавляют в водяной бане, после охлаждения до 45...50 ºС в него для подавления роста сопутствующей микрофлоры добав­ляют антибиотики (пенициллина 5*104 ЕД/л и стрептомицина 105 ЕД/л среды). Для приготовления влажной камеры со средой Ван—Итерсона на дно чашки Петри кладут слой ваты с кружком фильтровальной бумаги по диаметру чашки и стерилизуют в су­шильном шкафу. Перед посевом на фильтровальную бумагу на­ливают среду Ван—Итерсона до увлажнения бумаги, не создавая избытка влаги (около 5 мл).

Для выделения грибов из зерен последние раскладывают по поверхности фильтровальной бумаги по 10 штук, чтобы они не соприкасались одно с другим. Посевы культивируют при 22...25 °С 3...10 дней до образования характерного спороношения, после чего проводят макро- и микроскопическое исследова­ние культур грибов с целью идентификации.

При макроскопическом исследовании учитывают различные признаки выросших колоний: цвет, форму, консистенцию, ха­рактер роста, образование склероциев, выделение пигмента, степень развития воздушного мицелия. Затем готовят препараты «раздавленная капля». Микологическим крючком или препаро­вальной иглой берут частицы мицелия (желательно со спороношением из молодых культур с периферии, от старых — из центра колоний) и вносят их в фиксирующую жидкость. Другой иглой материал расправляют на предметном стекле и покрывают по­кровным стеклом, слегка прижимая его. Микроскопируют с по­мощью малого объектива (х8, х40) или в иммерсионной системе при слегка спущенном конденсоре. Токсичность культур опреде­ляют методом кожной пробы на кроликах или другим способом.

Физико-химический анализ. Его цель — качественное и количе­ственное определение микотоксинов в кормах и других материа­лах с помощью различных методов — люминесцентного анализа, хроматографии и т.д..

При оценке результатов анализов необходимо учитывать данные всех исследований, а в случае постановки диагноза — клинические признаки и характер патологоанатомических изменений.

Афлатоксикозы. Заболевания, возникающие при поедании животными кормов, содержащих афлатоксины. Все афлатоксины (В1, В2, С1, С2 и их производные M15, М2 и др.) отнесены к фурокумаринам. Афлатоксин М1 — продукт метаболизма афлатоксина В1 выделяющийся с молоком. В естественных условиях афлаток­сины встречаются в растительных продуктах, кроме того, неко­торые токсигенные штаммы грибов (Aspergillus flavus и A. parasiticus и др.) вырабатывают их при определенной темпера­туре и влажности.

Природные субстраты грибов-продуцентов: арахис, кукуруза и другие различные зерновые и бобовые культуры, семена хлопчат­ника и др. (рис. 136).

 

 

Афлатоксины оказывают гепатотоксическое и гепатоканцерогенное, мутагенное, тератогенное и иммунодепрессивное действие (рис. 137).

 

Наиболее чувствительны к афлатоксинам поросята в возрасте до 3 мес, супоросные свиноматки, телята, откормочные свиньи, взрослый крупный рогатый скот и овцы, лошади, птицы (утки, индейки, гуси, фазаны, куры). Де­фицит в кормах витаминов, белка или нарушение у животных обмена веществ повышают чувствительность животных к афлатоксинам.

Лабораторная диагностика афлатоксикозов включает в себя выделение афлатоксина и определение его количества методом тонкослойной хроматографии согласно действующей инструк­ции. Подтверждением служит обнаружение афлатоксина в орга­нах и тканях животного. Если в пробах не выделены афлатокси­ны, диагноз ставят по результатам выделения гриба-продуцента из фекалий или содержимого желудочно-кишечного тракта, ос­татков корма или пыли, взятых из силоса или бункера, где хра­нился корм, и воспроизведения в эксперименте культурой этого гриба заболевания (биопроба), аналогичного по всем признакам, которые наблюдали в хозяйстве.

Материал для исследования. В лабораторию отправляют корма, молоко, фекалии; от павших животных — печень, почки, мышеч­ную ткань.

Выделение и идентификация грибов рода Aspergillus, а также культуральные и морфологические свойства описаны в теме 37.

Охратоксикозы. Заболевания, возникающие при поедании животными кормов, содержащих охратоксины — производные гидроизокумарина. Из известных охратоксинов — А, В, С и D — наиболее токсичен охратоксин А, который относят к группе кислых микотоксинов, экстрагирующихся из корма при кислом рН.

Типичные продуценты охратоксинов: грибы Aspergillus ochraceum, от которых произошло название микотоксина (имен­но из них токсин был впервые выделен), и Penicillium viridicatum. Охратоксины могут продуцировать и другие грибы рода Aspergillus и Penicillium. Токсигенные штаммы A. ochraceus в боль­шинстве своем, кроме охратоксинов, образуют пенициллиновую кислоту, а штаммы P. viridicatum — цитрины. Поэтому на практи­ке корма могут быть заражены сразу несколькими токсинами. Однако основным токсическим агентом в этих случаях является охратоксин А.

Природные субстраты A. ochraceus и P. viridicatum: ячмень, ку­куруза, овес, пшеница, горох, рис, гречиха, соевые бобы, арахис, фасоль, земляные орехи, кофе и др.

Охратоксины оказывают на организм животных нефротоксическое, тератогенное и канцерогенное действие. Охратоксикозам подвержены свиньи, птицы, крупный рогатый скот, лошади. Очень чувствительны к охратоксинам собаки.

Лабораторная диагностика охратоксикозов направлена на об­наружение токсина или грибов-продуцентов и основана на ре­зультатах токсико-микологического и физико-химического ана­лиза кормов и патологического материала. Методы определения микотоксина и идентификации грибов-продуцентов описаны в данной теме. Выделение и идентификация грибов рода Aspergillus и Penicillium описаны в теме 37.

Пенициллотоксикозы. Заболевания, возникающие при поеда­нии животными кормов, зараженных микотоксином — пеницилловой кислотой. Последнюю длительное время применяли как антибиотик, но из-за высокой токсичности в лечебной практике больше не используют.

Продуценты пеницилловой кислоты: различные виды грибов, преимущественно рода Penicillium P. ruberulum, P. cyclopium, P. viridicatum и др. и некоторые варианты грибов родов Aspergillus, A. ochraceus, A. sulphureus.

Природные субстраты этих грибов: кукуруза, бобовые корма, табак.

По сравнению с фузарио- и аспергиллотоксикозами пеницил­лотоксикозы изучены недостаточно. Наиболее чувствительны к пеницилловой кислоте свиньи. Под влиянием этого токсина у животных происходит расширение кровеносных сосудов, глубо­кие дистрофические изменения в проксимальных канальцах по­чек. Пеницилловая кислота оказывает цитотоксическое, кардио-токсическое и канцерогенное действие на организм животных. В развитии смешанного микотоксикоза свиней, кроме различных токсинов, продуцируемых грибами рода Penicillium, принимает участие пеницилловая кислота.

Лабораторная диагностика пенициллотоксикозов основана на результатах токсико-микологического анализа, проводимого для обнаружения токсина или гриба-продуцента.

Рубратоксикозы. Группа болезней, развивающихся при скарм­ливании животным кормов, загрязненных рубратоксинами А, В, С. Наиболее распространен рубратоксин В.

Грибы-продуценты рубратоксина — Penicillium rubrum и P. purpurogenes. Последний вырабатывает в больших количествах рубратоксин В. Указанные грибы нередко выделяют из кормов вместе с токсигенными A.flavus, что говорит о возможности их синергического действия при совместном развитии на кормах.

Природные субстраты P. rubrum и P. purpurogenes: различные зерновые, бобовые, арахис, корма, семена подсолнечника и др.

Из сельскохозяйственных животных наиболее чувствительны к рубратоксину свиньи, особенно поросята. Наиболее остро и с высоким летальным исходом болезнь протекает у новорожден­ных поросят (токсин выделяется с молоком). Рубратоксины А и В оказывают гепатотоксическое, мутагенное и тератогенное дей­ствие на животных.

Лабораторная диагностика рубратоксикозов включает в себя выделение и идентификацию грибов рода Penicillium (см. тему 37).

Для воспроизведения заболевания в эксперименте ставят био­пробу на двух свиноматках с новорожденными поросятами из благополучного по инфекционным болезням хозяйства. Свино­маткам скармливают корм, загрязненный выделенной культурой гриба.

При положительном результате биопробы у свиноматок появ­ляются признаки отравления: диарея, угнетение, частичный от­каз от корма. Поросята после первого сосания свиноматки заболевают и погибают на 4...5-й день. Клинические признаки, патологоанатомические изменения у подопытных животных анало­гичны наблюдаемым в хозяйствах.

Фузариотоксикозы. Заболевания, развивающиеся при скармливании животным кормов, загрязненных микотокси-нами, продуцируемыми грибами только рода Fusarium, могут быть вызваны отдельными микотоксинами или их комбинацией. Фузариотоксикозы различают по видам микотоксинов.

Ф-2 токсикоз (микотоксический токсикоз, вульвовагинит непо­ловозрелых свинок).Болезнь вызывает зеараленон (токсин Ф-2, ферментативно-эстрогенное вещество (ФЭВ) и его производные: α и β-зеараленоны. Микотоксин оказывает на организм живот­ного эстрогенное (вызывающее охоту) и тератогенное воздей­ствие.

Продуценты микотоксина зеараленона — грибы F. graminearum, F. moniliforme и др. — типичные почвенные микроорга­низмы, способные развиваться на влажном корме при его хранении. Грибы хорошо растут на зерне пшеницы, кукурузы, сорго, хуже на зерне ячменя и овса, в сене. К зеараленонтоксикозам восприимчивы свиньи, крупный рогатый скот (болезнь характе­ризуется массовыми вульвовагинитами, отечностью молочной железы, у хряков отеком препуция). Наиболее чувствительны свиньи и хряки в возрасте 2...5 мес. α-Зеараленон в 3...4 раза, а β-зеараленон в 1,2 раза активнее по эстрогенному действию, чем зеараленон. В основном они влияют на матку, яичники, тестикулы и молочные железы. Из организма ассимилированный зеара­ленон и его токсические метаболиты выделяются с желчью, фе­калиями и мочой, а у лактирующих животных и с молоком. На птиц зеараленон действует слабее.

Лабораторная диагностика Ф-2 токсикоза (зеараленонтоксикоза) основана на обнаружении токсических доз микотоксина в корме и его токсических метаболитов α и β в органах и тканях животных; при подостром течении болезни — в фекалиях. Микотоксикологическое исследование (кукурузы, кормов) проводят с целью обнаружения гриба-продуцента.

При микотоксикологическом исследовании необходимо ис­ключить отравления, вызванные люцерной, клевером и другими бобовыми, содержащими эстрогенные вещества. При органолептическом исследовании выявляют пораженные грибами зерно­вые корма — легковесные зерна с матово-серой оболочкой; иног­да на оболочке заметны пятна или коростинки красного и розо­во-оранжевого цвета, представляющие собой грибницы или спороношение гриба. Такую окраску можно обнаружить и в самом зерне при его надломе.

Материал для исследования. В лабораторию отправляют корм, пораженные органы и ткани животных.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Соскобы с пораженных зерен, отобранных при органолептическом исследо­вании, помещают на предметное стекло в каплю 50%-го водного раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. В поле зрения обнаруживают характерный для гри­бов рода Fusarium септированный мицелий, макроконидии из не­скольких крупных удлиненных клеток веретенообразной или серповидной формы или микроконидии (более мелкие), чаще одноклеточные на простых или разветвленных конидиеносцах. Иногда находят хламидоспоры, склероции.

Выделение и идентификация грибов рода Fusarium. Грибы хоро­шо растут на агаре Чапека, сусло-агаре и среде Билай с рН 4,5...5,6 при температуре 18...24°С.

На твердых питательных средах F. graminearum образует коло­нии с хлопьевидным пушистым белым, бело-розовым или крова­во-красным мицелием.

При изучении морфологии выросшей культуры грибов обна­руживают на воздушном мицелии спородохии (сплетения конидиеносцев в виде подушечек на поверхности гифов), состоящие из макроконидий различной формы (веретеновидные, серповид­ные, эллиптически изогнутые, конические). Встречаются розо­вые или темно-красные склероции. Иногда обнаруживают промежуточные хламидоспоры.

С помощью токсикобиологического анализа выявляют дермонекротическое действие микотоксинов, находящихся в корме. Ф-2 токсин не оказывает дермо-некротическое действие, не вы­зывает летального исхода. Методы микотоксикобиологических исследований описаны ранее.

Т-2 токсикоз. Заболевание животных, возникающее при поеда­нии корма, загрязненного трихотеценовым микотоксином Т-2. Это наиболее изученный из типичных фузариотоксинов, проду­цент которого — гриб Fusarium sporotrichioides (син. F. tricinctum).

Биологическое действие токсина Т-2 многостороннее: он по­ражает сердечно-сосудистую и нервную системы, угнетает разви­тие лимфоидных органов у растущих животных, снижает количе­ство лейкоцитов в крови, ухудшает процесс выработки антител после активной иммунизации на ранней стадии развития иммун­ной реакции у животных, нарушает функции Т- и В-лимфоцитов, ингибирует биосинтез белка. Токсин Т-2 более опасен, чем другие известные микотоксины, продуцируемые грибами родов Aspergillus и Penicillium. Наиболее чувствительны к данному микотоксину крупный рогатый скот, свиньи, птицы, которым скарм­ливают токсический корм (зерно). Чувствителен к отравлению и человек при поедании так называемого «пьяного хлеба», выпе­ченного из зерна, пораженного токсигенным грибом.

Природные субстраты гриба F. sporotrichioides: кукуруза, силос, сено, пшеница и др.

Для постановки диагноза достаточно обнаружить определен­ное количество токсина в кормах согласно методике качествен­ного определения микотоксина Т-2 в зернофураже. Для микотоксикологического исследования корма необходимо предвари­тельно исключить инфекционную природу болезни (отечную бо­лезнь у свиней и др.), а также отравления ядовитыми растениями, минеральными и органическими ядами.

Токсикологическое исследование корма. Обязательно проводят биопробой на коже кролика. Методика описана выше. Токсин Т-2 оказывает резко выраженное дермонекротическое действие (рис. 138).

 

Рис. 138. Некроз кожи у кролика с образованием толстого струпа на месте нанесения эфирной вытяжки из культуры F. sporotrichioides, выращенной на овсе

 

Выделение и идентификация гриба F. sporotrichioides. Посевы культивируют из исследуемого материала, как при микотоксикозе Ф-2, после чего изучают культуральные и морфологические признаки выросших культур.

F. sporotrichioides образуют колонии с хорошо развитым воз­душным мицелием белого, розового или желтоватого цвета (рис. 139).

В препаратах из колоний обнаруживают микроконидии, чаще одноклеточные, реже с одной или тремя перегородками, груше­видной или лимоновидной, шаровидно-яйцевидной или веретенно-шаровидной формы (рис. 140). Встречаются также макроконидии веретенно-серповидной формы (рис. 141). Может быть обильное количе­ство хламидоспор.

Стахиботриотоксикоз. Ост­ро или подостро протекающий микотоксикоз, возникающий при поедании животными кормов и подстилки, загряз­ненных грибами Stachybotrys altemans (син. S. atra) или токсическими метаболитами этого гриба. Болезнь проявляется в виде поражений кожи, общего токсикоза, абортов, нарушений иммунной и нервной систем, изменений в кроветворных орга­нах, тяжелых расстройств желудочно-кишечного тракта. Отмеча­ют слабое прикрепление волос, иногда многочисленные крово­излияния на бесшерстных местах. Частные признаки болезни: конъюнктивит, гиперемия слизистой оболочки ротовой полости и носа, саливация и серозные, позднее серозно-геморрагические выделения из носа, некротические очаги на слизистой оболочке ротовой полости. Чаще обнаруживают некротические язвы на деснах вокруг зубов и на языке (рис. 142).

К стахиботриотоксикозу чувствительны лошади, крупный ро­гатый скот, овцы, птицы, свиньи.

Возбудитель стахиботриотоксикоза относят к высшим несо­вершенным грибам (класс Deuteromycetes) рода Stachybotrys (ак­тивные разрушители целлюлозы). Stachybotrys alternans образует сатратоксины A, D, F и другие, которые относят к группе трихотеценов. Трихотецены (известно около 60 токсинов) оказывают на животных нейротоксическое, геморрагическое, лейкопеническое, иммунодепрессивное, дермотоксическое, тератогенное действие. Токсин гриба Stachybotrys alternans образуется посте­пенно в стеригмах, конидиях и конидиеносцах и накапливается в субстрате. Токсин устойчив к нагреванию, даже автоклавированию, но инактивируется под действием щелочей и хлора. С пре­кращением роста гриба заканчиваются образование и накопле­ние микотоксина (10...25 дней).

Природные субстраты гриба: солома (ячменная, ржаная, пше­ничная, овсяная), сено (чаще злаковое), зерно (ячмень, овес), кукуруза, рис, горох, хлопок.

Лабораторная диагностика стахиботриотоксикоза основана на органолептическом, токсико-биологическом и микологическом исследовании корма.

Органолептическое исследование. При осмотре кормов обраща­ют внимание на наличие темного или черного налета на стеблях соломы (сена). В дифференциальном диагнозе исключают сап.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Обращают внимание на наличие вегетативных и репродуктивных структур, характерных для гриба. Соломинки, пораженные грибом S. alternans, отбирают с помощью лупы по черному порошистому налету, особенно в узлах соломинок. Налет соскабливают, поме­щают на предметное стекло в каплю 50%-го водного раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. В поле зрения обнаруживают темноокрашенные конидиеносцы и опавшие споры гриба (рис. 143).

 

Рис. 143. Конидиеносец (а) и конидии (6) Stachybot­rys alternans

 

Выделение и идентификация гриба S. alternans. Аэроб, темпера­турный оптимум 24...26°С, рН 6,8...7,0, влажность 45...50%. При влажности 20 % не растет. Гриб хорошо развивается на естествен­ных субстратах и на искусственных пи­тательных средах: Ван—Итерсона, на агаре Чапека или сусло-агаре. В чашках Петри на фильтровальной бумаге, смо­ченной средой Ван—Итерсона, S. alter­nans образует колонии от темно-серого до черного цвета (рис. 144).

 

На агаре Чапека гриб образует колонии с двумя зонами (рис. 145). Центральная зона складчатая, черного цвета, по пери­ферии отмечают белую прозрачную каемку. Цвет питательной среды вокруг колоний бурый, нередко с темно-вишневым оттен­ком. На сусло-агаре S. alternans образует черные колонии с бо­роздками, радиально расходящимися от центра.

Цвет мицелия в молодой культуре бледно-оливковый, с возра­стом становится оливково-бурым. Конидиеносцы также изменя­ются в зависимости от возраста и могут быть простыми и развет­вленными, с редкими перегородками. На верхушке конидиеносца можно наблюдать сросшиеся у основания яйцевидные стериг­мы, называемые мутовками. На вершине стеригм образуются одноклеточные округлые конидии. В молодой культуре они глад­кие, бледно-оливкового цвета. Зрелые конидии отличаются шиповидно-бородавчатой формой, непрозрачностью и черным цве­том. Каждая стеригма образует по 3...7 конидий. Они склеиваются рлизью и формируют головку на пучке стеригм (рис. 146).

Дендродохиотоксикоз. Тяжелопротекающий микотоксикоз, ча­сто с молниеносной гибелью. Характеризуется расстройством центральной нервной, сердечно-сосудистой и пищеварительной систем, кровоизлияниями во внутренних органах, язвенно-не­кротическими процессами на пятачке (у свиней), коже губ и сли­зистой оболочке ротовой полости, дегенеративными изменения­ми в паренхиматозных органах. В отличие от стахиботриотоксикоза при дендродохиотоксикозе отсутствуют кровоизлияния в паренхиматозных органах и изъязвления желудка.

Возбудитель — гриб Dendrodochium toxicum (рис. 147). Из гриба выделен микотоксин дендродохитоксин (дендродохин), который относят к трихотеценам. Из всех известных трихотеценовых микотоксинов дендродохин наибо­лее токсичен. Токсин образуется при 25 °С в субстрате, на котором растет гриб, в его мицелии и конидиях. Одно­кратная доза 350...450 г пораженной со­ломы вызывает гибель лошадей в тече­ние нескольких часов после приема корма. Дендродохин устойчив к высо­кой температуре, выдерживает нагрева­ние в течение 1 ч при 125°С.

 

Лабораторная диагностика дендродохиотоксикоза основана на результа­тах главным образом токсико-микологического анализа кормов, из которых выделяют гриб D. toxicum.

Материал для исследования. Грубые корма, в основном солома, мякина, сырой хлопок и другие растительные остатки, а также овес, суданская трава, конопля, горох, которые служат природ­ными субстратами для гриба D. toxicum.

Органолептическое исследование. Проводят в целях профилак­тики болезни за месяц до скармливания кормов животным.

На соломе чаще обнаружи­вают мицелий гриба и очень редко конидию. Часто у корма нормальный внешний вид, так как гриб разрастается в основ­ном внутри субстрата.

Микроскопическое исследо­вание. Проводят после посева исследуемого материала на растительные субстраты и пита­тельные среды (рис. 148).

Токсико-биологическое ис­следование. Заключается в из­влечении из корма токсических веществ и определении их дер-монекротического действия на кроликах. В качестве дополнительных исследований используют метод определения токсично­сти кормов на аквариумных рыбках и белых мышах, морских свинках и крысах. Методики описаны выше.

Выделение и идентификация гриба D. toxicum. Аэроб, хорошо растет на естественных средах: сене, ячмене и на обычных лабораторных средах: агаре Сабуро, сусло-агаре, среде Чапека и др. Температурный оптимум 20...25°С (диапазон 7...35°С). При бо­лее низкой температуре гриб образует только мицелий. Опти­мальная кислотность питательных сред для роста и развития гриба рН 6,0...7,0. На растительных субстратах на 3...4-й день после посева появляются небольшие рыхлые мицелиальные подушеч­ки, а затем на 10...12-й день — спородохии (рис. 149). Спородо­хии — тесный слой коротких, часто разветвленных конидиеносцев на поверхности выпуклого сплетения гиф и стромы в виде подушечек. Мицелий бесцветный, гифы септированные.

 

Рис. 149. Зерна овса, зараженного грибом D. toxicum (на зерновой оболочке темные спородохии гриба окружены белой каймой мицелия )

 

 

На агаре Сабуро обнаруживают шаровидные, реже грушевид­ные, интеркалярные и терминальные хламидоспоры. На жидких средах гриб растет на поверхности субстрата в виде пленчатого, вначале пушистого мицелия. На 5...7-й день развиваются споро­дохии. На агаре Чапека (рис. 150) при комнатной температуре гриб образует пушистый воздушный мицелий белого цвета, спо­родохии развиваются медленно. При температуре 22...25 °С обра­зуется белый стелющийся мицелий, колонии круглые, спородо­хии появляются на 4...5-й день. Спородохии — поверхностные, округлые или неправильной формы, 1,2 мм в диаметре. По пери­ферии окаймлены белым плоским мицелиальным ободком, в центре — оливково-черный слой конидий. С возрастом отдель­ные спородохии сливаются и образуют сплошной оливково-чер­ный слой.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Изучить культурально-морфологические свойства грибов родов Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Stachybotrys.

2. Провести органолептический анализ пораженных плесне­выми грибами кормов (комбикорма, сено).

3. Ознакомиться с результатами дермонекротической пробы на кролике.

4. Составить схему лабораторного исследования на микоток-сикозы.

 

Контрольные вопросы

1. В чем основные отличия микозов от микотоксикозов?

2. Каковы морфологические и культуральные свойства возбудителей микоток­сикозов?

3. Какой материал отправляют в лабораторию и в чем состоит его исследование на выявление микотоксинов?

4. Как ставят биопробу при диагностике микозов и микотоксикозов?

5. На каких питательных средах культивируют возбудители микозов и микотоксикозов?

 

 







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 2876. Нарушение авторских прав

codlug.info - Студопедия - 2014-2017 год . (0.016 сек.) русская версия | украинская версия